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章魚肉堿標準樣品的研制(一)

更新時間:2016-05-20      點擊次數(shù):1650

  章魚肉堿標準樣品。以章魚加工副產(chǎn)物為原料, 通過提取、 分離純化制備高純章魚肉堿, 采用紅外光譜(IR)、 高分辨質譜 (MS) 和核磁共振譜 (NMR) 進行結構確證。樣品分裝成 144 瓶, 采用離子色譜檢測法進行均勻性、 穩(wěn)定性檢驗和定值分析。從樣品中隨機抽取 15 瓶進行均勻性檢驗, 經(jīng) F 檢驗表明: 在 95% 的置信區(qū)間內樣品均勻性良好。在 0~4℃條件下, 經(jīng)過 24 個月長期試驗穩(wěn)定性考察, 結果表明樣品穩(wěn)定性良好。標準樣品經(jīng)國內 8 家具有分析資質的實驗室進行協(xié)同定值, 章魚肉堿標準樣品定值結果為 99.49%, 相對擴展不確定度為 0.14%(k=1.96)。該標準樣品達到標準樣品的技術要求, 可用于章魚肉堿相關產(chǎn)品的質量控制和分析方法校正。

  Development of Octopine Certified Reference Material

  Octopine certified reference material was developed. Octopine was made from the processing byproduct of octopus. The structure of octopine certified reference material was comfirmed by infrared spectroscopy (IR), high resolution mass spectral (HRMS) and nuclear magnetic resonance (NMR). Octopine was divided into 144 bottles. The homogeneity and stability testing and quantitative analysis method were evaluated by ions chromatography. According to analysis procedure of homogeneity, 15 bottles of sample were randomly taken from 144 bottles, the sample homogeneity of inspection validated by F–test statistical methods within the 95% confidence interval was good. The stability inspection was carried on the long-term(24 months), and the results indicated that the period for octopine of storage was 24 months at 0 – 4℃ . A cooperative certification was conducted with 8 qualified laboratories. The certified purity value of the reference material of octopine was 99.49% with the relative expaned uncertainty of 0.14 % (k=1.96). The reference material can conform to the technical requirement of the certified reference material. The material was intended for use in the method validation and quality control regarding octopine.

  章魚肉堿 (Octopine) 又名章魚堿, 在自然界中主要存在于章魚、 烏賊、 魷魚、 扇貝等海產(chǎn)軟體動物中, 由精氨酸與丙氨酸或丙酮酸在酶的作用下縮合而成, 具有重要的生物活性功能。研究發(fā)現(xiàn), 章魚肉堿是導致章魚、 扇貝等味道鮮美的原因之一; 章魚肉堿有助于降低小鼠血液中總膽固醇和VLDL, LDL 膽固醇的水平, 同時增加小鼠血液中HDL 膽固醇水平; 對比研究揭示喂食章魚肉堿可顯著提高小白鼠的交尾次數(shù)及妊娠概率。 此外,章魚肉堿還是一種表征品質和新鮮度的指示劑,可以應用于食品質量監(jiān)控及安全等方面。目前, 國內外未見章魚肉堿標準樣品研制的報道。筆者以章魚加工副產(chǎn)物為原料, 通過提取、 分離純化獲得高純章魚肉堿單體, 研制了標準樣品, 為深入開展相關研究提供物質基礎。

  1. 實驗部分

  1.1  主要儀器與試劑

  離子色譜儀: Dionex ICS–3000 型, 配備積分脈沖安培檢測器, 美國 Dionex 公司;

  紅外光譜儀: Bruker VERTEX 70 型,美 國Bruker 公司;

  高分辨質譜儀: Q–Tof micro 型, 美國 Waters 公司;

  核磁共振儀: Bruker 400 MHz 型, 美國 Bruker公司;

  天平: AL/104 型, 瑞士梅特勒 – 托利多集團;

  鹽酸、 醋酸鈉、 氫氧化鈉: 分析純;

  實驗用水來自 Milli-Q 純水系統(tǒng)。

  1.2  章魚肉堿樣品的制備

  以章魚加工副產(chǎn)物為原料, 經(jīng)浸提、 膜分離等步驟后獲得粗品, 再采用色譜分離、 濃縮、 干燥等精制方法獲得純度不小于 99% 的章魚肉堿。

  1.3  定性與定值分析

  采用紅外吸收光譜、 高分辨質譜及核磁共振譜等對章魚肉堿標準樣品進行定性分析。采用離子色譜法對章魚肉堿樣品定值檢測。

  1.4  色譜條件

  色譜柱: Dionex AminoPac PA–10柱(250 mm×2mm, 10 µm,美 國 Dionex 公 司 ) ;柱 流 量: 0.24mL/min ; 柱溫: 30℃; 進樣體積: 25 µL ; 流動相:A 為 水, B 為 250 mmol/L NaOH 溶 液, C 為 1.0mol/L NaOAc, 進行梯度洗脫, 洗脫程序見表 1。

  1.5  樣品溶液配制

打開章魚肉堿樣品瓶蓋子后, 精密稱取章魚肉堿適量, 用超純水配制成章魚肉堿質量濃度約為 8µg/mL 的溶液, 按照 1.4 色譜條件進行純度檢測,每個樣品重復進樣 3 次。

  1.6  均勻性檢驗

  按照 GB/T 15000.3–2008規(guī)定, 本項目確定抽樣數(shù)目為 15 個, 采用單因素多水平試驗方差分析法對章魚肉堿標準樣品進行純度均勻性檢驗, 測定方法采用上述的離子色譜檢測法, 每個樣品重復測3 次。檢測數(shù)據(jù)用方差分析法進行分析以判斷標準樣品的均勻性是否合格。

  1.7  穩(wěn)定性檢驗

  為了考察樣品的穩(wěn)定性, 確定其有效期, 取本標準樣品模擬上市包裝, 進行 0~4℃條件下的 24 個月長期試驗, 分別于 0, 3, 6, 9, 12, 18, 24 個月末取樣檢測, 通過考察標準樣品純度的變化來研究樣品的穩(wěn)定性。采用上述離子色譜檢測法, 每份樣品連續(xù)進樣 2 次, 然后用歸一法求出其純度的平均值。

 

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